como as células-tronco são cultivadas em laboratório?
células em crescimento no laboratório é conhecido como ” cultura celular.”As células-tronco podem proliferar em ambientes de laboratório em um prato de cultura que contém um caldo de nutrientes conhecido como meio de cultura (que é otimizado para o cultivo de diferentes tipos de células-tronco). A maioria das células-tronco se liga, divide e se espalha pela superfície do prato.
o prato de Cultura fica lotado à medida que as células se dividem, então elas precisam ser re-chapeadas no processo de subculturação, que é repetido periodicamente muitas vezes ao longo de muitos meses. Cada ciclo de subcultura é referido como uma ” passagem.”As células originais podem produzir milhões de células-tronco. Em qualquer fase do processo, lotes de células podem ser congelados e enviados para outros laboratórios para posterior cultura e experimentação.
como você “reprograma” células regulares para fazer iPSCs?
células diferenciadas, como células da pele, podem ser reprogramadas de volta para um estado pluripotente. A reprogramação é alcançada ao longo de várias semanas pela expressão forçada de genes que são conhecidos por serem reguladores mestres da pluripotência. No final desse processo, esses reguladores mestres remodelarão a expressão de toda uma rede de genes. As características das células diferenciadas serão substituídas por aquelas associadas ao estado pluripotente, essencialmente revertendo o processo de desenvolvimento.
como as células-tronco são estimuladas a se diferenciar?
desde que as células-tronco pluripotentes sejam cultivadas em Cultura sob condições apropriadas, elas podem permanecer indiferenciadas. Para gerar culturas de tipos específicos de células diferenciadas, os cientistas podem alterar a composição química do meio de cultura, alterar a superfície do prato de cultura, ou modificar as células forçando a expressão de genes específicos. Através de anos de experimentação, os cientistas estabeleceram alguns protocolos básicos, ou “receitas” para a diferenciação de células-tronco pluripotentes em alguns tipos de células (ver Figura 1 abaixo).
Figura 1. Diferenciação direcionada de células-tronco embrionárias de camundongos.
quais testes laboratoriais são usados para identificar células-tronco?Em vários pontos durante o processo de geração de linhas de células-tronco, os cientistas testam as células para ver se elas exibem as propriedades fundamentais que as tornam células-tronco. Esses testes podem incluir:
- verificar a expressão de vários genes que se mostraram importantes para a função das células-tronco.
- verificando a taxa de proliferação.
- verificando a integridade do genoma examinando os cromossomos das células selecionadas.
- Demonstrando o potencial de diferenciação das células, removendo os sinais de que manter as células em seu estado indiferenciado, o que fará com que células-tronco pluripotentes, espontaneamente, diferenciar, ou pela adição de sinais que induzem células-tronco adultas para se diferenciar em célula apropriada fenótipos.